Chapitre 03: Technique spectroscopique

Objectif du cours:

1.      Expliquer le concept d’étalonnage et son importance dans l’analyse quantitative.

2.      Les étudiants devraient être capables de déterminer la concentration inconnue d'un échantillon à partir de la courbe d'étalonnage, d'interpréter les résultats et d'utiliser l'échelle de teinte comme un complément visuel pour évaluer les concentrations.

Objectifs:

À la fin de ce TD, les étudiants devraient être capables de comprendre et d'appliquer la méthode d'étalonnage ainsi que la loi de Beer-Lambert pour déterminer la concentration d'une substance en solution à l'aide de mesures d'absorbance par UV-visible.

1.      Compréhension de la Loi de Beer-Lambert: Expliquer le principe de la loi de Beer-Lambert, qui établit la relation entre l'absorbance, la concentration d'une solution, et la longueur du chemin optique.

2.      Établissement de la Courbe d'Étalonnage: Tracer la courbe d'étalonnage (absorbance vs concentration) à partir des données des solutions étalons. Déterminer l'équation de la droite de régression linéaire pour pouvoir extrapoler la concentration d'échantillons inconnus.

3.      Calcul de la Concentration d'Échantillons : Appliquer l'équation de la droite régression linéaire pour déterminer la concentration d'échantillons inconnus en fonction de leur absorbance mesurée.

Objectifs

1.      Mettre en œuvre des méthodes d'extraction des pigments, comme l'utilisation de solvants organiques (ex : éthanol, acétone).

2.      Utiliser des techniques spectrophotométriques pour mesurer l'absorbance des solutions extraites.

3.      Calculer les concentrations des pigments en utilisant des équations fournies.

Objectifs

1.      Expliquer le principe de la méthode de Bradford, y compris le rôle du colorant Coomassie Brilliant Blue et son interaction avec les protéines.

2.      Apprendre à préparer des échantillons de protéines et des solutions étalons de concentrations connues pour établir une courbe d’étalonnage.

3.      Mesurer l'absorbance des solutions étalons à une longueur d'onde appropriée et tracer la courbe d'étalonnage pour relier absorbance et concentration de protéines.